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        新聞詳情

        人(Human)D-乳酸(DLA)ELISA檢測試劑盒操作注意事項

        日期:2022-06-16 09:43
        瀏覽次數:1364
        摘要:檢測原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯**吸附試驗(ELISA)。往預先包被D-乳酸(D-LA)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的D-乳酸(D-LA)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

        操作注意事項

        1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。

        2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

        3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍,*終結果乘以5才是樣本實際濃度。

        4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

        5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

        試劑盒組成

        名稱

        96孔配置

        48孔配置

        備注

        微孔酶標板

        12孔×8條

        12孔×4條

        標準品

        0.3mL*6管

        0.3mL*6管

        樣本稀釋液

        6mL

        3mL

        檢測抗體-HRP

        10mL

        5mL

        20×洗滌緩沖液

        25mL

        15mL

        按說明書進行稀釋

        底物A

        6mL

        3mL

        底物B

        6mL

        3mL

        終止液

        6mL

        3mL

        封板膜

        2張

        2張

        說明書

        1份

        1份

        自封袋

        1個

        1個

        注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、3、6、12、24、48μmol/L

        試劑的準備

         20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

        洗板方法

        1.  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

        2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

        操作步驟

        1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

        2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

        3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白孔不加。

        4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

        5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

        6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

        7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

        結果判斷

         繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

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