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        文章詳情

        人(Human)抗狂犬病毒抗體(anti-RV) ELISA檢測試劑盒使用說明書

        日期:2022-06-24 15:07
        瀏覽次數:365
        摘要:檢測原理 試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯**吸附試驗(ELISA)。往預先包被人抗狂犬病毒anti-RV抗原的包被微孔中,依次加入標本、HRP標記的檢測抗原,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中人抗狂犬病毒抗體(anti-RV)的存在與否。

        樣品收集、處理及保存方法

        1.  血清:使用不含熱原和內**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

        2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

        3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

        4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

        5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

        自備物品

        1. 酶標儀(450nm)

        2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

        3. 37℃恒溫箱

        操作注意事項

        1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。

        2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

        3.  預處理后的樣本請按照操作步驟用樣本稀釋液適當稀釋以達到試劑盒的的*佳檢測效果。

        4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

        5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

        試劑盒組成

        名稱

        96孔配置

        48孔配置

        備注

        微孔酶標板

        12孔×8條

        12孔×4條

        陰性對照

        0.5mL

        0.5mL

        陽性對照

        0.5mL

        0.5mL

        檢測抗-HRP

        10mL

        5mL

        20×洗滌緩沖液

        25mL

        15mL

        按說明書進行稀釋

        樣本稀釋液

        6mL

        3mL

        底物A

        6mL

        3mL

        底物B

        6mL

        3mL

        終止液

        6mL

        3mL

        封板膜

        2張

        2張

        說明書

        1份

        1份

        自封袋

        1個

        1個

         

        試劑的準備

         20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

        洗板方法

        1.  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

        2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

        操作步驟

        1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

        2.  設置陰、陽性對照孔和樣本孔,陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL;

        3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;

        4.  隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗原100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

        5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

        6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

        7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

        結果判斷

         1.  試驗有效性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;

                        陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

        2.  臨界值(Cut off)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

        3.  陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰性

        4.  陽性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽性

        試劑盒性能

        1.  準確性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;陰性對照孔OD值平均值≤0.15,說明試驗結果有效。

        2.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

        3.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

        4.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

        5.  有效期:6個月

        免責聲明

        1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。

        2.   嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。

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