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        文章詳情

        人**狀瘤病毒抗體IgG(HPV-IgG)定量檢測試劑盒使用說明書

        日期:2022-06-20 08:13
        瀏覽次數:966
        摘要:檢測原理】 本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯**吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被人抗原的透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中人**狀瘤病毒抗體IgG(HPV-IgG)濃度呈正相關,450nm波長下測定OD值,根據標準品和樣品的OD值,計算樣本中人**狀瘤病毒抗體IgG(HPV-IgG)含量。

        本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫學診斷。

         

        **狀瘤病毒抗體IgGHPV-IgG定量檢測試劑盒(ELISA

        使用說明書

        【試劑盒名稱】

        **狀瘤病毒抗體IgGHPV-IgG定量檢測試劑盒(ELISA

        【試劑盒用途

        定量檢測人血清、血漿及相關液體樣本中**狀瘤病毒抗體IgGHPV-IgG的含量。

        【檢測原理

        本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯**吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被人抗原的透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中**狀瘤病毒抗體IgGHPV-IgG濃度呈正相關,450nm波長下測定OD值,根據標準品和樣品的OD值,計算樣本中人**狀瘤病毒抗體IgGHPV-IgG含量。

        【試劑盒組成

        1

        酶標包被板

        12×8

        7

        顯色劑A

        6mL

        2

        標準品

        0.3mL×6

        8

        顯色劑B

        6mL

        3

        20倍濃縮洗滌液

        25mL

        9

        終止液

        6mL

        4

        稀釋液

        6mL

        10

        說明書

        1

        5

        特殊稀釋液

        6mL

        11

        封板膜

        2

        6

        酶標試劑

        6mL

        12

        密封袋

        1

        備注:標準品(1→6)濃度依次為:4800、2400、1200、600、300、150 U/mL

         

        需要而未提供的試劑和器材

        1、37℃恒溫箱

        2、 標準規格酶標儀

        3、 精密移液器及一次性吸頭

        4、 蒸餾水

        5、 一次性試管

        6、 吸水紙

        【操作步驟】

        1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。

        2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

        3、加標準品和待測樣本:取足夠數量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。

        4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

        5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

        6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。

        7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

        8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

        9、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,再加入顯色劑B50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min。

        10、終止:取出酶標板,每孔加終止50μL,終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。

        11、測定:以空白孔調零,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值OD值)。

        12、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。*終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。

        【樣本要求】

        1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

        2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

        3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。

        【注意事項】

        1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

        2、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

        3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。

        4、牢記樣本已經稀釋5倍,計算結果乘以5才是樣本實際濃度。

        5、本試劑盒定量范圍為150-4800 U/mL,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(150-4800 U/mL范圍內),乘以總稀釋倍數即為樣本*終濃度。

        6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。

        7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。

        8、試劑盒保質期內使用,不同批號的試劑不得混用。

        9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

         

        【操作程序總結】

         

        準備試劑,樣品和標準品 

         

        加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘

         

        洗板4次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘

         

        洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘

         

        加入終止液

         

        15分鐘之內讀OD

         

        計算

         

        檢測范圍

        150 U/mL - 4800 U/mL

        【規格】

        96人份/盒

        【貯藏】

        2-8℃,避光防潮保存。

        【有效期】

        6個月

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